Leishmania é um gênero de protozoários pertencente à ordem Kinetoplastida. Atualmente são reconhecidas três espécies envolvidas na etiologia da doença: Leishmania (Leishmania) donovani e Leishmania (Leishmania) infantum presente no Velho Mundo e Leishmania (Leishmania) chagasi preponderante no Novo Mundo, o qual se inclui o Brasil. Essa doença é transmitida pela picada de um flebótomo, infectado pela Leishmania, o qual introduz no hospedeiro as formas promastigotas (flageladas) que, nas células do sistema fagocítico mononuclear, transformam-se em formas amastigotas (sem flagelos). A forma amastigota multiplica-se, rompendo e invadindo outras células fagocitárias do hospedeiro vertebrado. Os reservatórios de leishmaniose incluem: roedores, felinos, caninos, seres humanos infectados e outros animais.
O diagnóstico baseia-se na detecção do material genético do parasito em amostras clínicas de animais infectados. A Real Time PCR permite a identificação do parasito com o uso de sondas específicas, através de amplificação do cinetoplasto da Leishmania sp., podendo ser utilizada no diagnóstico de leishmaniose tegumentar e visceral. A quantificação pode ser útil no monitoramento da carga parasitária em amostras de medula óssea e linfonodo de cães, principalmente em animais tratados. O controle interno funciona como controle da extração e da PCR, certificando que os resultados negativos são realmente negativos e que não se devem à inibição do PCR, má qualidade da extração e/ou problemas com algum reagente empregado.
Material:
Aspirado de medula óssea é indispensável o uso de EDTA, na proporção de 1:5 (1 parte de EDTA: 5 Partes de sangue). Para aspirados de linfonodos diluir as amostras sempre em 200 microlitros de solução fisiológica estéril. Não serão aceitas amostras em seringas. Amostras coaguladas e diluídas em outra solução a não ser solução fisiológica estéril ou com outro anti-coagulante não serão processadas. A confiabilidade, a especificidade e a sensibilidade do teste dependem do cumprimento de todas as recomendações.
Método:
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real –Real Time PCR. Reação de amplificação que define a presença do DNA do cinetoplasto da Leishmania sp.
Conservação para envio:
Enviar as amostras refrigeradas entre 2º a 8ºC em até 24 horas.
Prazo para entrega do resultado:
A verificar.